市面上普遍使用的玻璃底培养皿，通常是在塑料培养皿底部打孔，将约0.17mm厚的盖玻片或细胞爬片用无影胶水或硅胶粘贴。实际上，培养皿的整个底部并非都是玻璃材质，适用于观察的区域仅限于打孔部分。然而，由于玻璃的疏水性，细胞在玻璃表面上往往难以良好贴壁，生长状态不佳，甚至在共聚焦扫描成像时，可能会出现细胞脱落的现象。

为了确保细胞能够良好贴壁，使用玻璃底培养皿进行细胞培养前，必须确认已经对其进行特定蛋白试剂的包被。不同类型的细胞需要不同的包被试剂。同时，由于包被用的蛋白是生物产物，因此不同厂家的包被蛋白纯度和用量存在差异。在此技术推荐仅供参考，具体的使用量应根据所选品牌说明书来调整。此外，建议先进行梯度实验以找出最佳的包被浓度。

以Poly-L-Lysine（PLL，Sigma，P4832，100μg/ml）为例，PLL广泛适用于大多数细胞，特别是中枢神经元的培养。在使用时，需要确保单位面积上的蛋白含量（μg/cm²）达到理想水平。本例中推荐的包被用量为2μg/cm²。为了计算所需的蛋白质量，我们需要根据包被面积和体积来进行计算。例如：对于一个35mm的玻璃底培养皿，其细胞生长面积为35cm²，包被面积为41cm²，包被液体积为400μl，按照推荐的2μg/cm²用量，需要的PLL总量为82μg。如果加入400μl的PLL溶液，则其浓度为205μg/ml，因此需要用超纯水将其稀释到合适浓度。

具体步骤如下：

1. 用超纯水以1:5比例稀释PLL原液。
2. 在每个35mm玻璃底培养皿中加入400μl的PLL稀释液。
3. 在室温下孵育1-2小时后，吸出PLL稀释液。
4. 使用2ml PBS溶液或无血清培养基小心清洗3次，并吸尽清洗液。
5. 直接加入细胞悬液进行培养。

方法评估：由于各种包被蛋白性质的不同，具体的使用方法也各有差异。然而，包被过程中常常会引入新的污染物，往往在养细胞后才被发现，这不仅会浪费时间，也会导致试剂和耗材的浪费。另外，需要注意的是，质量过关的包被蛋白和玻璃底培养皿价格通常较高，劣质的培养皿可能因为胶水使用不均匀导致漏液，甚至对细胞产生毒性。

对于希望节省时间的研究者，使用无需包被的共聚焦培养皿将更为便捷。选择合适的培养皿时，需要考虑细胞是否适合贴壁以及培养皿光学特性是否符合共聚焦实验的要求。符合这些标准的培养皿不局限于带包被的玻璃底材料，实际上，许多塑料培养皿价格更为实惠，且相对于玻璃，更易于使细胞贴壁。

以AG百家乐的共聚焦培养皿为例，这些培养皿的物理参数非常接近玻璃，同时具备良好的亲水性，有利于大多数细胞的贴壁和生长。此外，它们相较于玻璃具有更好的透气性和延展性，避免了易碎的问题，因而是一个理想的选择。无论是细胞系还是原代细胞，AG百家乐的共聚焦培养皿都能为细胞培养提供良好的支持。